PCR實驗室設(shè)計要求、污染預(yù)防和控制，看懂秒變PCR實驗室大神！

一、PCR實驗室平面布局

PCR實驗室布局圖

PCR實驗室原則上分為四個單獨的工作區(qū)域：試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)、標(biāo)本制備區(qū)、擴增反應(yīng)混合物配置和擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)，為了避免交叉污染，進入各個工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵循單一方向進行，即只能從試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)，各實驗區(qū)之間的試劑及樣品傳遞應(yīng)通過傳遞窗進行。

二、實驗室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計及壓力控制

實驗室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)

PCR實驗室并沒有嚴(yán)格的凈化要求，但是為避免各個實驗區(qū)域間交叉污染的可能性，適合用全送全排的氣流組織形式。同時，要嚴(yán)格控制送、排風(fēng)的比例以保證實驗區(qū)的壓力要求。

二、1 實際貯存和準(zhǔn)備區(qū)

PCR實驗室主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝盒主反應(yīng)混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應(yīng)直接運送到這個區(qū)，不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并再本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。該區(qū)對與氣流壓力的控制沒有嚴(yán)格的要求。

二、2 標(biāo)本制備區(qū)

該區(qū)域主要進行的操作為樣本的保存、核酸（RNA、DNA）提取、貯存及其加入值擴增反應(yīng)管和測定DNA的合成。壓力梯度要求為：相對領(lǐng)巾區(qū)域為正壓，以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染，另外由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應(yīng)避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動。

二、3 擴增反應(yīng)混合物配制和擴增區(qū)

該區(qū)域主要進行的操作為DNA擴增，此外，已制備的DNA模板（來自樣本制備區(qū)）的加入和主反應(yīng)混合液（來自試劑貯存和制備區(qū)）制備成反應(yīng)混合液等也可以在本區(qū)內(nèi)進行。本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應(yīng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的布必要走動，個別操作如加樣等應(yīng)在超凈臺內(nèi)進行。

二、4 擴增產(chǎn)物分析區(qū)

該區(qū)域主要進行的操作為擴增片段的測定，本區(qū)是zui主要的擴增產(chǎn)物污染來源，因此對本區(qū)的壓力梯度要求為相對鄰近區(qū)域為負壓，以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至其他區(qū)域。

三、污染的預(yù)防與控制

PCR實驗室設(shè)計的核心問題是如何避免污染，在試劑工作中，常見的有以下幾種污染類型：擴增產(chǎn)物的污染；天然基因組DNA的污染；試劑的污染以及標(biāo)本間的污染。一旦發(fā)生污染，實驗就必須停止，直到找到污染源為止，而且實驗結(jié)果必須作廢，需要重新進行實驗，所以發(fā)生污染后再圍繞實驗室來尋找污染源不但耗時而且繁瑣，浪費人力物力。因此要避免污染，首先應(yīng)該是預(yù)防，而不是排除。

三、1 工作區(qū)域的嚴(yán)格劃分

1、各個實驗區(qū)域設(shè)置合理；

2、各個實驗區(qū)域要有明顯的標(biāo)記（如醒目的門牌或不同顏色的地面等等），以避免各個不同實驗區(qū)域設(shè)備物品、試劑等發(fā)生混淆。

三、2 合理的系統(tǒng)設(shè)置

1、合理的空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)置，盡量采用全送全排的空調(diào)系統(tǒng)；

2、嚴(yán)格的氣流壓力控制，保證不同的實驗區(qū)內(nèi)不同的壓力要求。

三、3 規(guī)范的操作

1、擴增檢驗實驗室的技術(shù)人員必須進行上崗培訓(xùn)，經(jīng)培訓(xùn)合格后才能從事臨床基因擴增檢驗的工作；

2、在實驗操作過程中，操作者必須戴手套，并經(jīng)常更換。此外，操作中使用一次性帽子也是一個有效防止污染的措施；

3、清潔工作及時、正確。實驗工作結(jié)束后，必須立即對本區(qū)進行清潔。除了常規(guī)的消毒液體對表面進行擦拭消毒或紫外燈的消毒外，對一些實驗設(shè)備還應(yīng)進行高壓消毒處理。

三、4 嚴(yán)格的管理

1、嚴(yán)格控制進出實驗室的人員，與實驗無關(guān)的人員不得隨意進出實驗室，有條件的情況下要設(shè)置獨立的通道和進出整個實驗區(qū)的門；

2、盡量減少在實驗區(qū)內(nèi)不必要的走動以及減少交叉污染的可能；

3、擴增產(chǎn)物分析區(qū)是zui主要的擴增產(chǎn)物污染來源，廢液不能再實驗室中傾倒，必須經(jīng)消毒液浸泡消毒后在遠離實驗室的地方棄掉，用過的吸頭等一次性材料也應(yīng)該經(jīng)過消毒液浸泡后統(tǒng)一處理，如焚燒等；

4、擴增產(chǎn)物分析區(qū)可能會用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)，應(yīng)特別注意實驗室人員的安全防護；

三、5 完善的實驗室配套設(shè)備

完備的實驗室設(shè)施是保證實驗工作的必要條件，應(yīng)根據(jù)各個實驗室實驗內(nèi)容的不同配備相應(yīng)的設(shè)備和儀器，如超凈工作臺，離心機。加樣器等等。